RNAprep Pure FFPE-Kit

A-1 Zelllyse oder Homogenisierung nicht ausreichend

---- Reduzieren Sie den Probenverbrauch, erhöhen Sie die Menge an Lysepuffer, erhöhen Sie die Homogenisierungs- und Lysezeit.

A-2 Probenmenge ist zu groß

---- Verringern Sie die verwendete Probenmenge oder erhöhen Sie die Menge an Lysepuffer.

A-1 Unzureichende Zelllyse oder Homogenisierung

---- Reduzieren Sie den Probenverbrauch, erhöhen Sie die Menge an Lysepuffer, erhöhen Sie die Homogenisierungs- und Lysezeit.

A-2 Probenmenge ist zu groß

----Bitte beachten Sie die maximale Verarbeitungskapazität.

A-3 RNA wird nicht vollständig von der Säule eluiert

---- Nach Zugabe von RNase-freiem Wasser einige Minuten ruhen lassen, bevor zentrifugiert wird.

A-4 Ethanol im Eluenten

---- Nach dem Spülen erneut zentrifugieren und Waschpuffer so weit wie möglich entfernen.

A-5 Zellkulturmedium wird nicht vollständig entfernt

---- Achten Sie beim Sammeln von Zellen darauf, das Kulturmedium so weit wie möglich zu entfernen.

A-6 Die in RNAstore gelagerten Zellen werden nicht effektiv zentrifugiert

---- Die RNAstore-Dichte ist höher als das durchschnittliche Zellkulturmedium; Daher sollte die Zentrifugalkraft erhöht werden. Es wird empfohlen, bei 3000x g zu zentrifugieren.

A-7 Niedriger RNA-Gehalt und -Häufigkeit in der Probe

---- Verwenden Sie eine positive Probe, um festzustellen, ob die geringe Ausbeute durch die Probe verursacht wird.

A-1 Das Material ist nicht frisch

---- Frisches Gewebe sollte sofort in flüssigem Stickstoff aufbewahrt oder sofort in das RNAstore-Reagenz gegeben werden, um den Extraktionseffekt sicherzustellen.

A-2 Probenmenge ist zu groß

---- Probenmenge reduzieren.

A-3 RNase-Kontaminationn

----Obwohl der im Kit enthaltene Puffer keine RNase enthält, kann RNase während des Extraktionsprozesses leicht kontaminiert werden und sollte mit Vorsicht behandelt werden.

A-4 Elektrophorese-Verschmutzung

---- Ersetzen Sie den Elektrophoresepuffer und stellen Sie sicher, dass die Verbrauchsmaterialien und der Ladepuffer frei von RNase-Kontaminationen sind.

A-5 Zu hohe Belastung für Elektrophorese

---- Reduzieren Sie die Menge der Probenbeladung, die Beladung jedes Wells sollte 2 μg nicht überschreiten.

A-1 Probenmenge ist zu groß

---- Probenmenge reduzieren.

A-2 Einige Proben haben einen hohen DNA-Gehalt und können mit DNase behandelt werden.

----Führen Sie eine RNase-freie DNase-Behandlung mit der erhaltenen RNA-Lösung durch, und die RNA kann nach der Behandlung direkt für nachfolgende Experimente verwendet oder durch RNA-Reinigungskits weiter gereinigt werden.

Für Glaswaren, 4 h bei 150°C gebacken. Bei Kunststoffbehältern 10 min in 0,5 M NaOH eingetaucht, dann gründlich mit RNase-freiem Wasser gespült und dann sterilisiert, um RNase vollständig zu entfernen. Die im Experiment verwendeten Reagenzien oder Lösungen, insbesondere Wasser, müssen frei von RNase sein. Verwenden Sie RNase-freies Wasser für alle Reagenzienzubereitungen (Wasser in eine saubere Glasflasche geben, DEPC bis zu einer Endkonzentration von 0,1% (V/V) hinzufügen, über Nacht schütteln und autoklavieren).