RNA Easy Fast Pflanzengewebe-Kit
Merkmale
■ Einfach und schnell: Die Gesamt-RNA-Extraktion aus Pflanzenproben kann innerhalb von 30 Minuten abgeschlossen werden.
■ Starke Kompatibilität: Dieses Kit ist nicht nur für gängige Stängel- und Blattproben geeignet, sondern auch für polysaccharid-/polyphenolreiche Proben.
■ Sicher und wenig toxisch: Toxische Reagenzien wie β-Mercaptoethanol, DTT, Chloroform, Phenol werden nicht benötigt.
Anwendungen
■ Geeignet für eine nachgelagerte Operation, einschließlich RT-PCR, RT-qPCR, Chip-Hybridisierung, Northern Blot, Dot Blot, PolyA-Screening, In-vitro-Translation, RNase-Schutzanalyse und molekulares Klonen usw.
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Die Gesamt-RNA von 65 mg Blattproben (Nelkenblätter, Hibiskusblätter, Weizenblätter, Reisblätter, Uglifruchtblätter, Prunus cerasifera Blätter, Feigenblätter, Taglilienblätter, Kerria japonica Blätter), 150 mg Pilzproben (Lentinus edodes) und 200 mg Blütenblattproben (Taglilienblütenblätter) wurden unter Verwendung des RNA Easy Fast Plant Tissue Kit.Agilent Bioanalyzer 2100 Analyseergebnisses der Gesamt-RNA aus Taglilienblütenblättern extrahiert. |
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Agilent Bioanalyzer 2100 Analyseergebnis der Gesamt-RNA aus Blütenblättern der Taglilie. |
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RNA, die aus verschiedenen in der Tabelle aufgeführten Proben mit dem RNA Easy Fast Plant Tissue Kit extrahiert wurde. Elutionsvolumen: 50 µl; Ladevolumen: 2 µl. Die Elektrophorese wurde bei 6 V/cm für 15 min auf einer 1% Agarose durchgeführt. |
A-1 Zelllyse oder Homogenisierung nicht ausreichend
---- Reduzieren Sie den Probenverbrauch, erhöhen Sie die Menge an Lysepuffer, erhöhen Sie die Homogenisierungs- und Lysezeit.
A-2 Probenmenge ist zu groß
---- Verringern Sie die verwendete Probenmenge oder erhöhen Sie die Menge an Lysepuffer.
A-1 Unzureichende Zelllyse oder Homogenisierung
---- Reduzieren Sie den Probenverbrauch, erhöhen Sie die Menge an Lysepuffer, erhöhen Sie die Homogenisierungs- und Lysezeit.
A-2 Probenmenge ist zu groß
----Bitte beachten Sie die maximale Verarbeitungskapazität.
A-3 RNA wird nicht vollständig von der Säule eluiert
---- Nach Zugabe von RNase-freiem Wasser einige Minuten ruhen lassen, bevor zentrifugiert wird.
A-4 Ethanol im Eluenten
---- Nach dem Spülen erneut zentrifugieren und Waschpuffer so weit wie möglich entfernen.
A-5 Zellkulturmedium wird nicht vollständig entfernt
---- Achten Sie beim Sammeln von Zellen darauf, das Kulturmedium so weit wie möglich zu entfernen.
A-6 Die in RNAstore gelagerten Zellen werden nicht effektiv zentrifugiert
---- Die RNAstore-Dichte ist höher als das durchschnittliche Zellkulturmedium; Daher sollte die Zentrifugalkraft erhöht werden. Es wird empfohlen, bei 3000x g zu zentrifugieren.
A-7 Niedriger RNA-Gehalt und -Häufigkeit in der Probe
---- Verwenden Sie eine positive Probe, um festzustellen, ob die geringe Ausbeute durch die Probe verursacht wird.
A-1 Das Material ist nicht frisch
---- Frisches Gewebe sollte sofort in flüssigem Stickstoff aufbewahrt oder sofort in das RNAstore-Reagenz gegeben werden, um den Extraktionseffekt sicherzustellen.
A-2 Probenmenge ist zu groß
---- Probenmenge reduzieren.
A-3 RNase-Kontaminationn
----Obwohl der im Kit enthaltene Puffer keine RNase enthält, kann RNase während des Extraktionsprozesses leicht kontaminiert werden und sollte mit Vorsicht behandelt werden.
A-4 Elektrophorese-Verschmutzung
---- Ersetzen Sie den Elektrophoresepuffer und stellen Sie sicher, dass die Verbrauchsmaterialien und der Ladepuffer frei von RNase-Kontaminationen sind.
A-5 Zu hohe Belastung für Elektrophorese
---- Reduzieren Sie die Menge der Probenbeladung, die Beladung jedes Wells sollte 2 μg nicht überschreiten.
A-1 Probenmenge ist zu groß
---- Probenmenge reduzieren.
A-2 Einige Proben haben einen hohen DNA-Gehalt und können mit DNase behandelt werden.
----Führen Sie eine RNase-freie DNase-Behandlung mit der erhaltenen RNA-Lösung durch, und die RNA kann nach der Behandlung direkt für nachfolgende Experimente verwendet oder durch RNA-Reinigungskits weiter gereinigt werden.
Für Glaswaren, 4 h bei 150°C gebacken. Bei Kunststoffbehältern 10 min in 0,5 M NaOH eingetaucht, dann gründlich mit RNase-freiem Wasser gespült und dann sterilisiert, um RNase vollständig zu entfernen. Die im Experiment verwendeten Reagenzien oder Lösungen, insbesondere Wasser, müssen frei von RNase sein. Verwenden Sie RNase-freies Wasser für alle Reagenzienzubereitungen (Wasser in eine saubere Glasflasche geben, DEPC bis zu einer Endkonzentration von 0,1% (V/V) hinzufügen, über Nacht schütteln und autoklavieren).
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